Bone slice （骨吸收實驗）骨切片操作流程
發布者：北京博蕾德生物 發布時間：2024-04-25 分享到：
骨吸收實驗
簡介：
該方法提供一種易于檢測的定量方案，用于體外測定破骨細胞介導的骨吸收。破骨細胞接種于骨切片上，吸收坑的形成可以通過甲苯胺藍染色進行定量。
實驗材料和試劑：
- 破骨細胞
- 骨切片
- 異丙醇
- 甲苯胺藍（Sigma cat#198161）
- 超純水
- 96孔細胞培養板（Greiner , Cat#650185）
實驗設備：
- 骨形態測量系統(http://www.osteometrics.com/product_info.htm)
- 超聲波清洗器
操作流程：
- 破骨細胞接種于（250000 細胞/孔）含和不含顱骨成骨細胞的96孔細胞培養板上（提前孔內放置骨切片）。
- 細胞在合適的培養基中37℃培養至少14天。
- 此后，用PBS洗滌細胞兩次，在250ul 70%異丙醇中，用超聲波高功率處理至少15分鐘，使細胞從骨切片脫落。
- 250ul 70%異丙醇處理使細胞更容易從骨切片脫落。
- 加入100ul 甲苯胺藍溶液（1%溶解于水），室溫染色2分鐘。
- 用250ul 超純水沖洗骨切片至少5次，以洗掉切片上的殘留物。
- 吸收坑被染成深藍色（圖1），吸收坑面積可以通過骨測量系統進行量化或者吸收坑可通過光學顯微鏡觀察計數。
參考文獻：（以上流程來源于參考文獻，僅供參考）
Scholtysek, C., Katzenbeisser, J., Fu, H., Uderhardt, S., Ipseiz, N., Stoll, C., Zaiss, M. M.,
Stock, M., Donhauser, L., Bohm, C., Kleyer, A., Hess, A., Engelke, K., David, J. P.,
Djouad, F., Tuckermann, J. P., Desvergne, B., Schett, G. and Kronke, G. (2013).
PPARbeta/delta governs Wnt signaling and bone turnover. Nat Med 19(5): 608-613.
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| Bone slice |
Bone Slice |
骨切片 |
250 |
50片（200um） |
| Bone slice |
Bone Slice |
骨切片 |
200 |
50片（400um） |
| IDS |
Bone slice |
骨切片 |
DT-1BON1000-96 |
50片（200um） |
